논문투고

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    논문명(한글) 항생제 선별 없이 alpha 1,3-Galactosyltransferase 유전자 넉아웃 기반 Membrane Cofactor Protein과 Thrombomodulin 유전자를 동시에 발현하는 세포라인 확립
    논문명(영문) Generation of alpha 1,3-Galactosyltransferase Knockout Pig Cell Expressing Membrane Cofactor Protein and Thrombomodulin without Application of Antibiotics for Selection
    성과주관부서 농촌진흥청 국립축산과학원 축산생명환경부 동물바이오공학과
    품목코드 축산 / 중가축 / 돼지
    학술지명 한국산학기술학회논문지 주저자 이해선
    성과년도 2021 성과적용일 2021년12월
    돼지와 영장류의 면역 차이로 이종이식 돼지 장기에서 보체 활성화, 염증반응 그리고 혈액 응고 등의 거부반응이 발생하며 수여 영장류를 사망에 이르게 한다. 인위적으로 Membrane cofactor protein(MCP) 및 Thrombomodulin(TBM)을 발현시키는 것은 이러한 거부반응으로부터 세포를 보호하고 영장류 생존기간을 연장한다고 보고되었으며 이전 연구에서 코돈 최적화 MCP(mMCP) 와 TBM cDNA를 활용한 발현 벡터를 구축한 바 있다. 본 연구의 목적은 항생제 저항성 유전자를 이용하지 않고 형질전환 세포 선별 시스템을 확립하며 alpha-1,3-Galactosyltransferase knock-out(GTKO)/mMCP/TBM 세포 라인을 개발하는 것이다. Nucleofection을 통해 mMCP/TBM 동시 발현 벡터를 도입한 GTKO 세포를 MCP에 대한 항체를 이용하여 MCP를 발현하는 세포만을 두 차례 분리하였다. 이를 통해 분리한 세포는 단일세포가 되도록 배양하였으며 유세포분석을 통한 MCP 발현 수준에 따라 단일 클론의 세포라인을 분류하여 선별하였다. 최종적으로 MCP 단백질 발현이 90% 이상인 GTKO/mMCP/TBM 유전자형 세포 라인 4종을 개발하였다. 선별된 클론들은 GTKO/mMCP/TBM 돼지 생산을 위한 핵이식 공여세포로 활용할 예정이다. 항생제 저항성 유전자를 사용하지 않는 선별 기술은 향후 의료용 원료 동물 생산에 효과적으로 활용될 수 있을 것으로 기대된다.
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